Javascript pašlaik ir atspējots jūsu pārlūkprogrammā.Ja javascript ir atspējots, dažas šīs vietnes funkcijas nedarbosies.
Havjers Fidalgo, * Pjērs Antuāns Deglesne, * Rodrigo Arojo, * Liliana Sepulveda, * Jevgeņija Ranneva, Filipa Deprē Zinātņu nodaļa, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalonija, Spānija * Šiem autoriem ir daži ieskati šajā darbā Equal ieguldījuma fons: Hialuronskābe (HA) ir dabiski sastopams polisaharīds, ko izmanto dermas pildvielu ražošanā estētiskiem nolūkiem.Tā kā to pussabrukšanas periods cilvēka audos ir vairākas dienas, dermas pildvielas uz HA bāzes tiek ķīmiski modificētas, lai pagarinātu to dzīvi organismā.Visizplatītākā komerciālo HA bāzes pildvielu modifikācija ir 1,4-butāndiola diglicidilētera (BDDE) izmantošana kā šķērssaistīšanas līdzeklis HA ķēžu šķērssavienošanai.Atlikušais vai neizreaģējušais BDDE tiek uzskatīts par netoksisku, ja ir <2 daļas uz miljonu (ppm);tādēļ, lai nodrošinātu pacienta drošību, ir jānosaka atlikušais BDDE daudzums gala dermālajā pildvielā.Materiāli un metodes: šajā pētījumā ir aprakstīta BDDE un HA šķērssaistīšanas reakcijas blakusprodukta noteikšana un raksturošana sārmainos apstākļos, apvienojot šķidruma hromatogrāfiju un masas spektrometriju (LC-MS).Rezultāti: Pēc dažādām analīzēm tika atklāts, ka HA-BDDE hidrogēla dezinficēšanai izmantotie sārmaini apstākļi un augstā temperatūra veicināja šī jaunā blakusprodukta, “propilēnglikolam līdzīgā” savienojuma veidošanos.LC-MS analīze apstiprināja, ka blakusproduktam ir tāda pati monoizotopiskā masa kā BDDE, atšķirīgs aiztures laiks (tR) un atšķirīgs UV absorbcijas (λ=200 nm) režīms.Atšķirībā no BDDE, LC-MS analīzē tika novērots, ka tādos pašos mērījumu apstākļos šim blakusproduktam ir lielāks noteikšanas ātrums pie 200 nm.Secinājums: šie rezultāti liecina, ka šī jaunā savienojuma struktūrā nav epoksīda.Diskusija ir atvērta, lai novērtētu šī jaunā blakusprodukta risku, kas atrodams HA-BDDE hidrogēla (HA dermas pildvielas) ražošanā komerciāliem nolūkiem.Atslēgas vārdi: hialuronskābe, HA dermālais pildviela, šķērssaistītā hialuronskābe, BDDE, LC-MS analīze, BDDE blakusprodukts.
Pildvielas uz hialuronskābes (HA) bāzes ir visizplatītākie un populārākie ādas pildvielas, ko izmanto kosmētikas nolūkos.1 Šis dermālais pildviela ir hidrogēls, kas parasti sastāv no >95% ūdens un 0,5–3% HA, kas piešķir tiem želejveida struktūru.2 HA ir polisaharīds un galvenā mugurkaulnieku ekstracelulārās matricas sastāvdaļa.Viena no sastāvdaļām.Tas sastāv no (1,4)-glikuronskābes-β (1,3)-N-acetilglikozamīna (GlcNAc) atkārtotām disaharīda vienībām, kas savienotas ar glikozīdu saitēm.Šis disaharīdu modelis ir vienāds visos organismos.Salīdzinot ar dažiem proteīnu bāzes pildvielām (piemēram, kolagēnu), šī īpašība padara HA par ļoti bioloģiski saderīgu molekulu.Šiem pildvielām var būt specifiska aminoskābju secība, ko var atpazīt pacienta imūnsistēma.
Lietojot kā ādas pildvielu, galvenais HA ierobežojums ir tā straujā aprite audos, jo tajā ir specifiska enzīmu saime, ko sauc par hialuronidāzēm.Līdz šim ir aprakstītas vairākas ķīmiskas modifikācijas HA struktūrā, lai palielinātu HA pussabrukšanas periodu audos.3 Lielākā daļa šo modifikāciju mēģina samazināt hialuronidāzes piekļuvi polisaharīdu polimēriem, sasaistot HA ķēdes.Tāpēc, veidojot tiltus un starpmolekulārās kovalentās saites starp HA struktūru un šķērssaistīšanas aģentu, šķērssaistītais HA hidrogels rada vairāk anti-enzīmu noārdīšanās produktu nekā dabiskais HA.4-6
Līdz šim ķīmiskie šķērssaistīšanas līdzekļi, kas izmantoti šķērssaistīta HA ražošanai, ir metakrilamīds, 7 hidrazīds, 8 karbodiimīds, 9 divinilsulfons, 1,4-butāndiola diglicidilēteris (BDDE) un poli(etilēnglikola) diglicidilēteris.10,11 BDDE pašlaik ir visbiežāk izmantotais šķērssaistīšanas līdzeklis.Lai gan ir pierādīts, ka šāda veida hidrogēli ir droši gadu desmitiem, izmantotie šķērssaistīšanas līdzekļi ir reaktīvi reaģenti, kas var būt citotoksiski un dažos gadījumos mutagēni.12 Tāpēc to atlikuma saturam galīgajā hidrogēlā jābūt augstam.BDDE tiek uzskatīts par drošu, ja atlikuma koncentrācija ir mazāka par 2 daļām uz miljonu (ppm).4
Ir vairākas metodes, lai noteiktu zemu atlieku BDDE koncentrāciju, šķērssaistīšanas pakāpi un aizvietošanas pozīciju HA hidrogēlos, piemēram, gāzu hromatogrāfija, izmēru izslēgšanas hromatogrāfija kopā ar masas spektrometriju (MS), kodolmagnētiskās rezonanses (NMR) fluorescences mērīšanas metodes un Diožu masīva savienota augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija (HPLC).13-17 Šis pētījums apraksta blakusprodukta noteikšanu un raksturojumu galīgajā šķērssaistītā HA hidrogēlā, kas iegūts BDDE un HA reakcijā sārmainos apstākļos.HPLC un šķidruma hromatogrāfijas-masu spektrometrija (LC-MS analīze).Tā kā šī BDDE blakusprodukta toksicitāte nav zināma, mēs iesakām tā atlieku kvantitatīvo noteikšanu noteikt līdzīgi tai metodei, ko parasti veic ar BDDE galaproduktā.
Iegūtā HA nātrija sāls (Shiseido Co., Ltd., Tokija, Japāna) molekulmasa ir ~1 368 000 Da (Lorāna metode) 18 un raksturīgā viskozitāte ir 2,20 m3/kg.Šķērssaistīšanas reakcijai BDDE (≥95%) iegādājās no Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, ASV).Fosfātu buferēts sāls šķīdums ar pH 7,4 tika iegādāts no Sigma-Aldrich Company.Visi LC-MS analīzē izmantotie šķīdinātāji, acetonitrils un ūdens tika iegādāti no HPLC kvalitātes.Skudrskābi (98%) iegādājas kā reaģentu.
Visi eksperimenti tika veikti ar UPLC Acquity sistēmu (Waters, Milford, MA, ASV) un savienoti ar API 3000 trīskāršā kvadrupola masas spektrometru, kas aprīkots ar elektrosmidzināšanas jonizācijas avotu (AB SCIEX, Framingham, MA, ASV).
Šķērssaistīto HA hidrogēlu sintēze tika uzsākta, pievienojot 198 mg BDDE 10% (w/w) nātrija hialuronāta (NaHA) šķīdumam 1% sārma (nātrija hidroksīda, NaOH) klātbūtnē.Galīgā BDDE koncentrācija reakcijas maisījumā bija 9,9 mg/ml (0,049 mM).Pēc tam reakcijas maisījumu rūpīgi samaisa un homogenizēja un ļāva turpināties 45 ° C temperatūrā 4 stundas.19 Reakcijas pH tiek uzturēts pie ~12.
Pēc tam reakcijas maisījumu mazgā ar ūdeni, un galīgo HA-BDDE hidrogelu filtrēja un atšķaida ar PBS buferšķīdumu, lai sasniegtu HA koncentrāciju no 10 līdz 25 mg / ml un galīgo pH 7, 4.Lai sterilizētu ražotos šķērssaistītos HA hidrogēlus, visi šie hidrogēli tiek autoklāvāti (120°C 20 minūtes).Attīrīts BDDE-HA hidrogels tiek uzglabāts 4 ° C temperatūrā līdz analīzei.
Lai analizētu šķērssaistītajā HA produktā esošo BDDE, tika nosvērts 240 mg paraugs un ievietots centrālajā caurumā (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, ASV; tilpums 0,5 ml) un centrifugēts ar ātrumu 10 000 apgr./min istabas temperatūrā. 10 minūtes.Kopumā tika savākti un analizēti 20 µL nolaižamā šķidruma.
Lai analizētu BDDE standartu (Sigma-Aldrich Co) sārmainos apstākļos (1%, 0,1% un 0,01% NaOH), ja ir izpildīti šādi nosacījumi, šķidruma paraugs ir 1:10, 1:100 vai līdz 1:1 000 000 Ja nepieciešams, analīzei izmantojiet MilliQ dejonizētu ūdeni.
Šķērssaistīšanas reakcijā izmantotajiem izejmateriāliem (HA 2%, H2O, 1% NaOH un 0,049 mM BDDE) tika analizēts 1 ml katra parauga, kas sagatavots no šiem materiāliem, izmantojot tādus pašus analīzes apstākļus.
Lai noteiktu jonu kartē redzamo pīķu specifiku, 20 µL paraugam pievienoja 10 µL 100 ppb BDDE standartšķīduma (Sigma-Aldrich Co).Šajā gadījumā standarta galīgā koncentrācija katrā paraugā ir 37 ppb.
Vispirms sagatavojiet BDDE izejas šķīdumu ar koncentrāciju 11 000 mg/L (11 000 ppm), atšķaidot 10 μL standarta BDDE (Sigma-Aldrich Co) ar 990 μL MilliQ ūdens (blīvums 1,1 g/mL).Izmantojiet šo šķīdumu, lai sagatavotu 110 µg/L (110 ppb) BDDE šķīdumu kā standarta standarta atšķaidījumu.Pēc tam izmantojiet starpprodukta BDDE standarta šķīdinātāju (110 ppb), lai sagatavotu standarta līkni, vairākas reizes atšķaidot starpproduktu šķīdinātāju, lai sasniegtu vēlamo koncentrāciju 75, 50, 25, 10 un 1 ppb.Kā parādīts 1. attēlā, ir konstatēts, ka BDDE standarta līknei no 1,1 līdz 110 ppb ir laba linearitāte (R2>0,99).Standarta līkne tika atkārtota četros neatkarīgos eksperimentos.
1. attēls BDDE standarta kalibrēšanas līkne, kas iegūta ar LC-MS analīzi, kurā tiek novērota laba korelācija (R2>0,99).
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija.
Lai identificētu un kvantificētu BDDE standartus, kas atrodas šķērssaistītajā HA, un BDDE standartus bāzes šķīdumā, tika izmantota LC-MS analīze.
Hromatogrāfiskā atdalīšana tika veikta LUNA 2,5 µm C18(2)-HST kolonnā (50 × 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, ASV) un analīzes laikā tika turēta istabas temperatūrā (25 °C).Kustīgā fāze sastāv no acetonitrila (šķīdinātājs A) un ūdens (šķīdinātājs B), kas satur 0,1% skudrskābes.Kustīgo fāzi eluē ar gradienta eluēšanu.Gradients ir šāds: 0 minūtes, 2% A;1 minūte, 2% A;6 minūtes, 98% A;7 minūtes, 98% A;7,1 minūtes, 2% A;10 minūtes, 2% A. Darbības laiks ir 10 minūtes un injekcijas tilpums ir 20 µL.BDDE aiztures laiks ir aptuveni 3,48 minūtes (svārstās no 3,43 līdz 4,14 minūtēm, pamatojoties uz eksperimentiem).Mobilā fāze tika sūknēta ar plūsmas ātrumu 0,25 ml/min LC-MS analīzei.
BDDE analīzei un kvantitatīvai noteikšanai ar MS palīdzību UPLC sistēma (Waters) tiek apvienota ar API 3000 trīskāršā kvadrupola masas spektrometru (AB SCIEX), kas aprīkots ar elektrosmidzināšanas jonizācijas avotu, un analīze tiek veikta pozitīvo jonu režīmā (ESI+).
Saskaņā ar BDDE veikto jonu fragmentu analīzi par fragmentu ar vislielāko intensitāti tika noteikts fragments, kas atbilst 129,1 Da (6. attēls).Tāpēc daudzjonu monitoringa režīmā (MIM) kvantitatīvai noteikšanai BDDE masas konversija (masas un lādiņa attiecība [m/z]) ir 203,3/129,1 Da.LC-MS analīzei tiek izmantots arī pilnas skenēšanas (FS) režīms un produkta jonu skenēšanas (PIS) režīms.
Lai pārbaudītu metodes specifiku, tika analizēts tukšais paraugs (sākotnējā kustīgā fāze).Tukšajā paraugā ar masas konversiju 203,3/129,1 Da signāls netika atklāts.Attiecībā uz eksperimenta atkārtojamību tika analizētas 10 standarta injekcijas ar 55 ppb (kalibrācijas līknes vidū), kā rezultātā atlikušā standarta novirze (RSD) bija <5% (dati nav parādīti).
Atlikušais BDDE saturs tika kvantitatīvi noteikts astoņos dažādos autoklāvos BDDE šķērssaistītos HA hidrogēlos, kas atbilst četriem neatkarīgiem eksperimentiem.Kā aprakstīts sadaļā “Materiāli un metodes”, kvantitatīvā noteikšana tiek novērtēta pēc BDDE standarta atšķaidījuma regresijas līknes vidējās vērtības, kas atbilst unikālajam maksimumam, kas konstatēts BDDE masas pārejā 203,3/129,1 Da ar aizturi. laiks no 3,43 līdz 4,14 minūtēm Negaida.2. attēlā parādīts 10 ppb BDDE atsauces standarta hromatogrammas piemērs.1. tabulā ir apkopots astoņu dažādu hidrogēlu atlikušais BDDE saturs.Vērtību diapazons ir no 1 līdz 2,46 ppb.Tāpēc BDDE atlikuma koncentrācija paraugā ir pieņemama lietošanai cilvēkiem (<2 ppm).
2. attēls. 10 ppb BDDE atsauces standarta (Sigma-Aldrich Co) jonu hromatogramma, MS (m/z) pāreja, kas iegūta ar LC-MS analīzi 203,30/129,10 Da (pozitīvā MRM režīmā).
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju monitorings;MS, masa;m/z, masas un lādiņa attiecība.
Piezīme: paraugi 1-8 ir autoklāvēti BDDE šķērssaistīti HA hidrogēli.Tiek ziņots arī par BDDE atlikušo daudzumu hidrogēlā un BDDE aiztures laika maksimumu.Visbeidzot, tiek ziņots arī par jaunu maksimumu esamību ar atšķirīgu aiztures laiku.
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;HA, hialuronskābe;MRM, vairāku reakciju monitorings;tR, aiztures laiks;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;RRT, relatīvais aiztures laiks.
Pārsteidzoši, LC-MS jonu hromatogrammas analīze parādīja, ka, pamatojoties uz visiem analizētajiem autoklāvētajiem šķērssaistītajiem HA hidrogēla paraugiem, bija papildu maksimums pie īsākā aiztures laika no 2, 73 līdz 3, 29 minūtēm.Piemēram, 3. attēlā ir parādīta šķērssaistīta HA parauga jonu hromatogramma, kur parādās papildu maksimums pie atšķirīga aiztures laika, kas ir aptuveni 2,71 minūtes.Tika konstatēts, ka novērotais relatīvais aiztures laiks (RRT) starp tikko novēroto maksimumu un BDDE maksimumu ir 0,79 (1. tabula).Tā kā mēs zinām, ka nesen novērotais maksimums ir mazāk saglabāts C18 kolonnā, ko izmanto LC-MS analīzē, jaunais maksimums var atbilst polārākam savienojumam nekā BDDE.
3. attēls Šķērssaistītā HA hidrogēla parauga jonu hromatogramma, kas iegūta ar LC-MS (MRM masas konversija 203,3/129,0 Da).
Saīsinājumi: HA, hialuronskābe;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju monitorings;RRT, relatīvais aiztures laiks;tR, aiztures laiks.
Lai izslēgtu iespēju, ka jaunie novērotie maksimumi varētu būt piesārņotāji, kas sākotnēji bija izmantotajās izejvielās, arī šīs izejvielas tika analizētas, izmantojot to pašu LC-MS analīzes metodi.Analizētie izejmateriāli ir ūdens, 2% NaHA ūdenī, 1% NaOH ūdenī un BDDE tādā pašā koncentrācijā, ko izmantoja šķērssaistīšanas reakcijā.Izmantotā izejmateriāla jonu hromatogramma neuzrādīja nevienu savienojumu vai maksimumu, un tā aiztures laiks atbilst jaunajam novērotajam maksimumam.Šis fakts atmet domu, ka ne tikai izejmateriāls var saturēt savienojumus vai vielas, kas var traucēt analīzes procedūru, bet arī nav nekādu pazīmju par iespējamu savstarpēju piesārņojumu ar citiem laboratorijas produktiem.Koncentrācijas vērtības, kas iegūtas pēc BDDE un jaunu pīķu LC-MS analīzes, ir parādītas 2. tabulā (1.-4. paraugs) un jonu hromatogramma 4. attēlā.
Piezīme: 1.–4. paraugi atbilst izejvielām, ko izmanto, lai ražotu autoklāvētus BDDE šķērssaistītus HA hidrogēlus.Šie paraugi netika autoklāvāti.
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;HA, hialuronskābe;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju uzraudzība.
4. attēls atbilst HA un BDDE šķērssaistīšanas reakcijā izmantotā izejmateriāla parauga LC-MS hromatogrammai.
Piezīme: tos visus mēra tādā pašā koncentrācijā un attiecībās, ko izmanto, lai veiktu šķērssaistīšanas reakciju.Ar hromatogrammu analizēto izejvielu skaitļi atbilst: (1) ūdenim, (2) 2% HA ūdens šķīdumam, (3) 1% NaOH ūdens šķīdumam.LC-MS analīze tiek veikta masas konversijai 203,30/129,10 Da (pozitīvā MRM režīmā).
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;HA, hialuronskābe;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju uzraudzība.
Tika pētīti apstākļi, kas izraisīja jaunu virsotņu veidošanos.Lai izpētītu, kā šķērssaistītā HA hidrogēla iegūšanai izmantotie reakcijas apstākļi ietekmē BDDE šķērssaistīšanas aģenta reaktivitāti, izraisot jaunu pīķu veidošanos (iespējamie blakusprodukti), tika veikti dažādi mērījumi.Šajos noteikumos mēs pētījām un analizējām galīgo BDDE šķērssavienojumu, kas tika apstrādāts ar dažādām NaOH koncentrācijām (0%, 1%, 0, 1% un 0, 01%) ūdens vidē, kam sekoja autoklāvēšana vai bez tās.Baktēriju procedūra, lai simulētu tos pašus apstākļus, ir tāda pati kā metode, ko izmanto šķērssaistītā HA hidrogēla iegūšanai.Kā aprakstīts sadaļā “Materiāli un metodes”, parauga masas pāreja tika analizēta ar LC-MS līdz 203,30/129,10 Da.Tiek aprēķināts BDDE un jaunā pīķa koncentrācija, un rezultāti parādīti 3. tabulā. Paraugos, kas nebija autoklāvāti, netika konstatēti jauni maksimumi neatkarīgi no NaOH klātbūtnes šķīdumā (1.-4. paraugi, tabula 3).Autoklāvētiem paraugiem jauni maksimumi tiek konstatēti tikai NaOH klātbūtnē šķīdumā, un šķiet, ka pīķa veidošanās ir atkarīga no NaOH koncentrācijas šķīdumā (5.-8. paraugs, 3. tabula) (RRT = 0,79).5. attēlā parādīts jonu hromatogrammas piemērs, kurā parādīti divi autoklāvēti paraugi NAOH klātbūtnē vai bez tā.
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju uzraudzība.
Piezīme: augšējā hromatogramma: paraugu apstrādāja ar 0,1% NaOH ūdens šķīdumu un autoklāvā (120 °C 20 minūtes).Apakšējā hromatogramma: paraugu neapstrādāja ar NaOH, bet autoklāvēja tādos pašos apstākļos.Masas konversija 203,30/129,10 Da (pozitīvā MRM režīmā) tika analizēta ar LC-MS.
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju uzraudzība.
Visos autoklāvātos paraugos, ar vai bez NaOH, BDDE koncentrācija tika ievērojami samazināta (līdz 16,6 reizēm) (5.-8. paraugs, 2. tabula).BDDE koncentrācijas samazināšanās var būt saistīta ar faktu, ka augstā temperatūrā ūdens var darboties kā bāze (nukleofils), lai atvērtu BDDE epoksīda gredzenu, veidojot 1,2-diola savienojumu.Šī savienojuma monoizotopiskā kvalitāte atšķiras no BDDE kvalitātes, tāpēc tā netiks ietekmēta.LC-MS atklāja masas nobīdi 203,30/129,10 Da.
Visbeidzot, šie eksperimenti parāda, ka jaunu pīķu veidošanās ir atkarīga no BDDE, NAOH klātbūtnes un autoklāvēšanas procesa, bet tam nav nekāda sakara ar HA.
Pēc tam jauno maksimumu, kas tika atrasts pie aptuveni 2, 71 minūtes aiztures laika, raksturoja ar LC-MS.Šim nolūkam BDDE (9, 9 mg / ml) inkubēja 1% NaOH ūdens šķīdumā un autoklāvēja.4. tabulā jaunā pīķa raksturlielumi ir salīdzināti ar zināmo BDDE atsauces maksimumu (aiztures laiks aptuveni 3,47 minūtes).Pamatojoties uz divu pīķu jonu fragmentācijas analīzi, var secināt, ka maksimums ar aiztures laiku 2,72 minūtes uzrāda tos pašus fragmentus kā BDDE maksimums, bet ar atšķirīgu intensitāti (6. attēls).Pīķim, kas atbilst aiztures laikam (PIS) 2, 72 minūtes, pēc sadrumstalotības pie masas 147 Da tika novērots intensīvāks maksimums.Pie šajā noteikšanā izmantotās BDDE koncentrācijas (9,9 mg/mL) pēc hromatogrāfiskās atdalīšanas tika novēroti arī dažādi absorbcijas režīmi (UV, λ=200 nm) ultravioletajā spektrā (7. attēls).Pīķis ar aiztures laiku 2,71 minūtes joprojām ir redzams pie 200 nm, savukārt BDDE maksimumu nevar novērot hromatogrammā tādos pašos apstākļos.
4. tabula Jaunā maksimuma ar apmēram 2,71 minūtes aiztures laiku un BDDE maksimuma ar 3,47 minūtes aiztures laiku raksturojuma rezultāti
Piezīme. Lai iegūtu šos rezultātus, abām virsotnēm tika veiktas LC-MS un HPLC analīzes (MRM un PIS).HPLC analīzei izmanto UV noteikšanu ar viļņa garumu 200 nm.
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;HPLC, augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfija;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju monitorings;m/z, masas un lādiņa attiecība;PIS, produkts Jonu skenēšana;ultravioletā gaisma, ultravioletā gaisma.
Piezīme. Masas fragmentus iegūst ar LC-MS analīzi (PIS).Augšējā hromatogramma: BDDE standarta parauga fragmentu masas spektrs.Apakšējā hromatogramma: atklātā jaunā maksimuma masas spektrs (ar BDDE maksimumu saistītā RRT ir 0,79).BDDE tika apstrādāts 1% NaOH šķīdumā un autoklāvēts.
Saīsinājumi: BDDE, 1,4-butāndiola diglicidilēteris;LC-MS, šķidruma hromatogrāfija un masas spektrometrija;MRM, vairāku reakciju monitorings;PIS, produkta jonu skenēšana;RRT, relatīvais aiztures laiks.
7. attēls. 203,30 Da prekursoru jonu jonu hromatogramma un (A) jaunais maksimums ar aiztures laiku 2,71 minūte un (B) BDDE atsauces standarta maksimuma UV noteikšana pie 3,46 minūtēm pie 200 nm.
Visos saražotajos šķērssaistītajos HA hidrogēlos tika novērots, ka atlikušā BDDE koncentrācija pēc LC-MS kvantitatīvās noteikšanas bija <2 ppm, bet analīzē parādījās jauns nezināms maksimums.Šis jaunais maksimums neatbilst BDDE standarta produktam.Arī BDDE standarta produktam ir veikta tāda pati kvalitātes konversija (MRM konversija 203,30/129,10 Da) pozitīvajā MRM režīmā.Parasti citas analītiskās metodes, piemēram, hromatogrāfiju, tiek izmantotas kā robežpārbaudes, lai noteiktu BDDE hidrogēlos, bet maksimālā noteikšanas robeža (LOD) ir nedaudz zemāka par 2 ppm.No otras puses, līdz šim KMR un MS ir izmantoti, lai raksturotu HA šķērssaistīšanas un/vai modifikācijas pakāpi šķērssaistītu HA produktu cukura vienību fragmentos.Šo metožu mērķis nekad nav bijis kvantitatīvi noteikt atlikušo BDDE noteikšanu tik zemās koncentrācijās, kā mēs aprakstām šajā rakstā (mūsu LC-MS metodes LOD = 10 ppb).
Izlikšanas laiks: 01.09.2021